Vacunas de bacterias recombinantes vivas

La vacunación es uno de los logros más importantes en la historia de la medicina, que ha ido evolucionando a lo largo de los años permitiendo una reducción significativa de la mortalidad infantil, una disminución de la incidencia de enfermedades e incluso la erradicación de algunas de ellas en países enteros. Las vacunas de nueva generación surgen para reducir o eliminar las carencias de las vacunas “tradicionales”. Técnicas biotecnológicas basadas en el ADN recombinante han dado lugar, entre otras, a las vacunas de bacterias recombinantes vivas. Estas vacunas pueden ser de dos tipos: las bacterias modificadas genéticamente, que proporcionaran inmunidad contra la enfermedad que causan o, bacterias ya sean patógenas o no, que portan ADN heterólogo para la producción de un antígeno contra el que queremos inmunizar. Esta fusión entre la tecnología de ADN recombinante y el uso de vectores bacterianos ofrece múltiples ventajas tanto desde el punto de vista logístico y comercial como inmunológico. En el presente trabajo se ha realizado una recopilación de los principales vectores bacterianos usados hasta la fecha, además de una selección de los artículos de investigación sobre este tipo de vacunas, en base a las enfermedades consideradas de mayor relevanciaUniversidad de Sevilla. Grado en Farmaci

Development of vaccines for HIV-1: relevance of subtype-specific cellular immunity

Han pasado casi 30 años de la detección de los primeros casos de infección con HIV-1 y aún no se ha conseguido desarrollar una vacuna efectiva y segura. A pesar del impacto positivo sobre la pandemia que se ha conseguido gracias a los avances en la terapia antirretroviral (TARV), el HIV/sida sigue constituyendo un grave problema para la salud pública, especialmente en los países en desarrollo, donde es difícil el acceso al tratamiento. En el mundo, 33 millones de personas viven con el virus del sida, mientras que en la Argentina se calcula que habría unos 120 000 infectados. Uno de los desafíos para lograr una vacuna contra el HIV es la variabilidad viral. El grupo M, responsable de la pandemia, se encuentra dividido en 10 subtipos y varios sub-subtipos, además de las 48 formas recombinantes circulantes y más de cien formas recombinantes únicas. La epidemia de HIV en nuestro país es tan compleja como en el resto del mundo, con la co-circulación principalmente de virus pertenecientes al subtipo B y recombinantes BF (CRF12_BF y derivadas). A pesar de la cantidad de trabajos dedicados a la caracterización de la respuesta inmune y al desarrollo de vacunas, no queda claro cuál es el impacto de la variabilidad en la elección del antígeno. Trabajos realizados en nuestro laboratorio demuestran el papel que juega la inmunidad celular con respecto a las variantes recombinantes BF, tanto en humanos como en modelos animales. Estos resultados son de importancia en el desarrollo de futuras vacunas para nuestra región.It has been almost 30 years since the detection of the first HIV-1 cases and yet an effective and safe vaccine has not been developed. Although, advances in antiretroviral therapy (HAART) have produced a major impact on the pandemic, and even though HIV/aids remains a major concern for developing countries, where access to therapy is limited. The last report from UNAIDS notified 33 million people living with HIV/aids, worldwide, while in Argentina it is estimated that 120 000 persons have been infected. One of the challenges to address and ultimately overcome when developing a vaccine is the high variability of HIV-1. The M group, responsible for the pandemic, is divided into 10 subtypes and several sub-subtypes, in addition to the 48 circulating recombinant forms (CRF) and over one hundred unique recombinant forms (URF). The HIV epidemic in Argentina is as complex as in the rest of the world, characterized by the high prevalence of infections caused by subtype B and BF variants. Despite the wide range of publications focused on the immune response against HIV as well as to vaccine development, how to overcome variability on vaccine antigen selection is still unclear. Studies performed in our laboratory showed the impact of the immunogenicity of BF recombinant variants, both in humans and in animal models. These results are of great concern in vaccine development for our region.Fil: Rodríguez, Ana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; ArgentinaFil: Turk, Gabriela Julia Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pascutti, María Fernanda. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Falivene, Juliana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gherardi, Maria Magdalena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentin

Active immunotherapy in the treatment of haematological neoplasias

Abstract The continuous search for therapeutic approaches that improve the conventional treatments of neoplasms, together with an improved understanding of the immune system, has led in recent years to the development of Immunotherapy. Basically, a distinction can be made between two forms of immunotherapy: passive immunotherapy, which consists in the transfer of antibodies or cells previously generated in vitro that are directed against the tumour, and active immunotherapy, which attempts to activate in vivo the immune system and induce it to elaborate a specific response against the tumor antibodies. Hematological neoplasms, specifically some B lymphomas, express in their membrane an immunoglobulin that is considered a specific antigen of the tumour, which is why these diseases have become the ideal target for immunotherapy treatments. There are many alternatives, ranging from protein vaccines, which have already shown clinical benefits, to those of the second generation, which make use of the new techniques of molecular biology to increase the efficacy of the vaccines and obtain their production in a quicker and less costly way, but with which there are not yet definitive clinical results

Evaluación de la vacuna multicomponente TcVac1 contra la enfermedad de Chagas utilizando un protocolo de electroporación intradérmica

Tesis de Doctorado de WAEL HEGAZY HASSAN MOUSTAFATrypanosoma cruzi (T. cruzi), un protozoario hemoflagelado, es el agente etiológico de la enfermedad de Chagas. Ésta es la causa más común de muertes relacionadas insuficiencia cardiaca congestiva entre los adultos jóvenes en las áreas endémicas de Sudamérica, Centroamérica y México. También se ha convertido en un problema de salud importante en los Estados Unidos y Europa debido a la migración a gran escala de latinoamericanos en las últimas décadas. Los esfuerzos para el desarrollo de vacunas contra la infección por T. cruzi han aumentado en los últimos años. Nuestro grupo de trabajo ha diseñado una serie de vacunas (TcVac) compuestas por antígenos de membrana anclados a la GPI derivados de T. cruzi. Se ha demostrado que las vacunas TcVac aumentan las respuestas inmunitarias humorales y celulares y proporcionan un control significativo (pero no completo) de la infección experimental en ratones y perros. En el presente documento, nos propusimos probar dos protocolos de inmunización para la entrega de la vacuna de ADN (TcVac1) compuesta de antígenos TcG2 y TcG4 en un modelo de ratón BALB/c. En un primer ensayo se comparó la protección conferida por la vacuna TcVac1 administrada vía intramuscular (IM) contra el protocolo de vacunación electroporación/intradérmica (IDE). Se vacunaron cuatro veces, con quince días de diferencia a doce ratones BALB/c por grupo. Dos semanas después de la última inmunización, se sacrificó a la mitad de los animales (n=6) de cada tratamiento, para la evaluación de la eficacia de la vacuna en la pre-infección y la segunda mitad (n=6) se sacrificaron 60 días después de la infección con trypomastigotes cepa Sylvio X10/4 de T. cruzi, para ser evaluados durante la fase aguda de la infección. La respuesta inmune humoral se evaluó mediante la evaluación de los subtipos de IgG anti-TcG2 y anti-TcG4 utilizando un ensayo de ELISA. La respuesta inmunitaria celular se evaluó mediante un ensayo de proliferación de linfocitos. Por último, se evaluaron los aspectos clínicos y morfopatológicos para todos los animales experimentales. Nuestros resultados demostraron que al comparar la entrega IDE TcVac1 frente a la entrega IM, el primero indujo un nivel significativamente mayor de respuesta de anticuerpos específicos por III antígeno (IgG2a+IgG2b>IgG1) y proliferación de linfocitos, que se expandió en respuesta al desafío de infección. La evaluación histológica después de la infección por desafío mostró infiltración de células inflamatorias (macrófagos y linfocitos) en el corazón y el tejido esquelético de todos los ratones infectados. Sin embargo, el mayor aumento de infiltrados inflamatorios se observó en ratones TcVac1_IDE/Tc en comparación con TcVac1_IM/Tc o ratones no vacunados/infectados. La extensión del infiltrado inflamatorio tisular se asoció directamente con el control de los nidos de amastigotes intracelulares en ratones vacunados/infectados (contra a los no vacunados/infectados). Nuestros resultados sugieren que la administración de IDE mejora la eficacia protectora de la vacuna TcVac1 contra la infección por T. cruzi en ratones en comparación con la administración IM de la vacuna. Posteriormente en un segundo experimento, se probó la eficacia de diferentes dosis vacunales utilizando la modificación a la vacuna eliminando los plásmidos que codifican para la interleucina-12 y factor estimulante de colonias granulocitos-macrófagos (GM-CSF). En este ensayo, se probaron cinco dosis diferentes (1, 5, 10, 15 y 20ug) de la vacuna para determinar la dosis óptima recomendada para prevenir la infección por T. cruzi con aplicación intradérmica/electroporación de la vacuna. En este experimento se utilizaron cuarenta y dos ratones hembra, cepa CD1, subdivididos en 7 tratamientos diferentes (n=6/grupo). Después de la vacunación, los ratones fueron desafiados con cepa Ninoa/MHOM/MX/1994 de T. cruzi (500 trypomastigotes/ratón, intraperitonealmente). Se analizaron parámetros tales como parasitemia, prueba de supervivencia, prueba serológica (ELISA) y análisis histopatológicos para evaluar la eficacia de la protección de la vacuna y determinar la dosis óptima. Los resultados demostraron que el grupo vacunado con 10 μg de dosis de ADN plasmídico indujeron los mejores niveles de inmunoglobulinas específicos, la parasitemia más baja y el mayor control del nidos de parásitos en cardiomiocitos y tejido muscular esquelético. Se confirmó que la aplicación intradérmica en conjunto con la electroporación es un método eficaz para la administración de vacunas con ADN, ya que mejora la inmunogenicidad del plásmido entregado, y reduce el tiempo y el costo de preparación de la vacuna, se minimiza la dosis de la vacuna, el número de IV refuerzos de la vacuna se reduce a una sola aplicación y la vacuna no requiere el uso de adyuvantes. La patología es una disciplina que depende crucialmente de la interpretación de imágenes para el diagnóstico y pronóstico de enfermedades. Tradicionalmente las técnicas de interpretación se basaron en gran medida en el análisis subjetivo de los especímenes, con un acuerdo variable entre los observadores. La interpretación moderna hace uso tanto del análisis molecular, como de la cuantificación objetiva de a través de microscopía auxiliada por sistemas de digitalización óptica. La dificultad para que el sistema ocular/cerebro humano analice objetivamente un objeto dentro de una escena, independientemente de su información contextual (por ejemplo, la percepción de un objeto dado puede ser muy diferente según su contexto), lo que promueve la necesidad de un ayuda microscopía computarizada para su uso en la patología molecular. De ahí que nuestro tercer experimento se enfocó en el desarrollo de un sistema digital de análisis de imágenes histopatológicas. En este tercer ensayo se utilizaron técnicas computarizadas de análisis digital de imágenes histopatológicas (técnicas de interpretación histológica basadas en el análisis de imágenes, cuantificación molecular de marcadores mixtos en estudios colorimétricos) enfocado en la detección y conteo de los infiltrados linfocitarios, conteo de cardiomiocitos y la determinación de hipertrofia cardiaca en ratones infectados con cepa Sylvio X10/4 de T. cruzi y la comparación de los resultados obtenidos con los resultados histológicos basados en observación y análisis visual realizado con tres patólogos en un ensayo doble ciego. Se usaron ratones BALB/c (n=48), los cuales fueron vacunados con TcVac1 vía intradérmica con electroporación, los ratones fueron sacrificados al día 60 post-infección y el análisis histopatológico se llevó a cabo como sigue; A) Se examinaron al menos cinco secciones por tejido (ventrículo derecho, ventrículo izquierdo y septum) para cada ratón para detectar la presencia de inflamación aguda y nidos de parásitos (magnificación: 400X y 100X), el parasitismo tisular se evaluó contando los nidos de amastigotes presentes en 100 campos microscópicos en cada uno de los corazones analizados. Del mismo modo, el V infiltrado inflamatorio se visualizó en >200 campos microscópicos de las secciones de tejido del corazón, tres patólogos analizaron en un estudio doble ciego las muestras, y se registraron los resultados finales del consenso. B) los tejidos fueron procesados en cortes 4 μm, teñidos con HE y analizados en las mismas secciones mencionados anteriormente. Los tejidos fueron observados bajo microscopio óptico y se llevó a cabo el análisis colorimétrico a través del software Image-Pro Plus 5.1. para todas las muestras. Finalmente, la comparación de los datos obtenidos de ambas técnicas fueron comparados. Los resultados mostraron la eficacia del análisis computarizado y la precisión de los datos obtenidos, donde había una diferencia estadísticamente significativa (P˂0.05) entre los grupos vacunados y no vacunados. la conclusión del presente experimento fue la obtención de datos cuantitativos para los estudios histopatológicos sin la necesidad de usar otras técnicas más costosas como inmunohistoquímica, FISH, ISH (silver-based), immunocitoquìmica, expresión de proteínas marcadas, etc. y evadir el margen de error humano en la recopilación y procesamiento de datos.UAEM con número de registro 3326/2012C, y al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT No. 156701), bajo la responsabilidad del Dr. Juan Carlos Vázquez Chagoyán Título: Correlación de las concentraciones séricas de troponina I con los cambios clínicos cardiovasculares en perros infectados con Trypanosoma cruzi en fase crónica Clave: 4518/2018/C

Impacto de la biotecnología en la inmunología

La biotecnología ha conducido al desarrollo de la inmunología en la generación de pruebas diagnósticas, fármacos y vacunas, útiles en la profilaxia, diagnóstico y tratamiento de una variedad de enfermedades infecciosas y autoinmunitarias y el cáncer. Hoy en día se reconoce que no sólo los investigadores, sino también las principales compañías farmacéuticas internacionales, han comprendido que la terapia tradicional con productos químicos y farmacéuticos está siendo reemplazada por productos derivados de la biotecnología, particularmente la aplicada a la inmunología (conocida como inmunobiotecnología), principalmente por su efectividad en aspectos de salud, pero también debido a que es ecológicamente sustentable y generadora de riqueza comercial

Preparado alimenticio para animales que protege, vehicula oralmente y mantiene la funcionalidad de moléculas de ADN con interés en producción y sanidad animal, así como el procedimiento para su obtención

ES2641601 A1 (10.11.2017) P201600417 (09.05.2016)Preparado alimenticio para animales que protege, vehicula oralmente y mantiene la funcionalidad de moléculas de ADN con interés en producción y sanidad animal, así como el procedimiento para su obtención. Las moléculas de ADN, en particular plásmidos de ADN, se incorporan a unas nano-micro-macrocápsulas de quitosano, alginato y otros componentes, y posteriormente se incluyen en el interior de una masa de ingredientes alimenticios sometidos a extrusión, granulación o a una combinación de ambos procedimientos, bajo condiciones que garantizan la integridad del ADN dentro de los gránulos de pienso. La posterior administración oral del preparado permite una dosificación precisa de la cantidad de ADN, lo protege durante el tránsito por el tubo digestivo y mantiene su viabilidad hasta los tramos del intestino en los que ejerce su efecto fisiológico. Los plásmidos así vehiculados expresan en animales vivos los genes de interés que portan en su construcción al menos durante 60 días.UNIVERSIDAD DER ALMERÍ

Propuestas vacunales para el tratamiento de la fasciolosis en rumiantes, un desafío aún no resuelto

La fasciolosis producida por el trematodo Fasciola hepatica es una enfermedad que provoca importantes pérdidas económicas en la producción ganadera siendo además una preocupante enfermedad zoonótica. Actualmente, la única herramienta disponible para el control de dicha enfermedad es la utilización de fármacos antiparasitarios. Hoy, la aparición de fenómenos de resistencia antiparasitaria llevan a la búsqueda de nuevas opciones terapéuticas. La búsqueda de antígenos vacunales para el desarrollo de una vacuna eficaz es una de las herramientas más investigadas. En el presente artículo se expone una revisión de los principales resultados obtenidos hasta el momento en la búsqueda de diversos candidatos vacunales. Se comparan diferentes intentos de vacunas experimentales: desde vacunas irradiadas atenuadas, hasta las nuevas estrategias que involucran el desarrollo de vacunas recombinantes y de ADN en el modelo ratón y en el huésped susceptible.The use of an effective vaccine against fasciolosis is currently and due to advances in the field, an achievable goal. This article is a review of recent data and the main results about the search for vaccine candidates against fasciolosis. In the present work it presents the search done and results from the use of attenuated vaccines irradiated to new strategies that involve the development of recombinant vaccines and DNA

Virus del papiloma humano y cáncer

Introducción: los virus del papiloma humano (VPH) son un grupo de virus que se caracterizan por causar infecciones de la piel y de las mucosas. Algunos de ellos tienen un elevado potencial oncogénico, causando distintos tipos de cánceres, entre los que destaca el cáncer de cérvix, una de las principales causas de muerte en mujeres en los países en vías de desarrollo. Objetivo: el objetivo principal de este trabajo ha sido revisar los conocimientos actuales sobre el estado de los VPH y su relación con el cáncer de cérvix. Metodología: la búsqueda de artículos se ha realizado utilizando principalmente las bases de datos Pubmed y Elsevier. Resultados y discusión: este trabajo se ha centrado en los VPH causantes de cáncer de cérvix, descubriendo que la diferencia entre estos y los VPH no oncogénicos es su capacidad para integrarse y transformar las células que infectan. Los tratamientos existentes en la actualidad dependen del estadio de las lesiones, siendo los más comunes las intervenciones quirúrgicas, entre las que destaca la conización. En cuanto a las medidas de profilaxis, se han desarrollado en los últimos años tres vacunas, cuya diferencia principal es la cobertura de tipos de VPH que ofrecen, y se han desarrollado pruebas de cribado citológico, como el test de Papanicolaou o el test de VPH, cuyos objetivos son la detección precoz de infecciones pre-oncogénicas, evitando así su progresión hacía cáncer. Conclusiones: la infección por VPH es la infección de transmisión sexual (ITS) más frecuente, pero en la mayoría de los casos no tiene consecuencias negativas. La importancia recae principalmente en las mujeres por el posible desarrollo de cáncer de cérvix por lo que es fundamental seguir las recomendaciones profilácticas existentes en la actualidad, así como continuar avanzando en el desarrollo de fármacos antivirales efectivos.Universidad de Sevilla. Grado en Farmaci

Determinación de seropositividad contra 7 serovares de leptospira en caninos inmunizados con vacunas recombinantes y atenuadas en la ciudad de Pereira, Risaralda

El objetivo de este trabajo fue determinar la seropositividad de 7 serovares de leptospira en caninos inmunizados con vacunas recombinantes y atenuadas. Diseño experimental: Estudio descriptivo Animales: 14 caninos (13 hembras y 1 macho) con edades comprendidas entre 6 meses y 1,5 años, sin inmunización previa. Intervenciones: la sangre para la muestra se extrajo de las venas cefálica y yugular y se procesó en el sistema. Por medio de la técnica de microaglutinación, se observó que para los 14 perros vacunados era negativo sin presencia de titulación de anticuerpos para ambas vacunas. Determinar que ambas vacunas proporcionan la misma inmunidad. Esta fue la razón para la determinación de la seropositividad frente a 7 serovares de leptospira en una población de caninos inmunizados con vacunas recombinantes y atenuadas en la ciudad de Pereira, mediante el uso de una prueba de diagnóstico serológico conocida como Microaglutinación (MAT)